溶媒抽出法、固相抽出法、除タンパク法

料理の下ごしらえと同じように目的物質をより定量しやすくするためには、邪魔者である不純物を取り除くことが必要となることがあります。今回は邪魔者を前処理する方法について見ていきたいと思います。

 

 

前処理には大きく以下の3つの方法があります。

 

• 溶媒抽出法
• 固相抽出法
• 除タンパク法

 

溶媒抽出法

溶媒抽出法は、水と有機溶媒(ヘキサン、ベンゼン、酢酸エチル、クロロホルム、ブタノール)など互いに混ざりあわないものを一定の割合で混合したものに、試料溶液を加えて振り混ぜます。その後、静置して再び二層に分離させることで目的物質を片方の層に濃縮させる方法です。

 

 

溶媒抽出法において有機溶媒の層へより抽出効率を上げるには以下のような方法があります。

 

• 抽出を複数回行う；より濃縮される
• 分子形にする；有機溶媒には分子形の方が溶ける
• 塩析をする；NaClを加えることで、水層のイオン性が高くなる。そうすると水層にいた目的物質はいごこちが悪くなるので、有機層に移る

 

 

溶媒抽出法は、タンパク質を多く含む試料から低分子化合物を抽出するのには適しません。なぜなら、タンパク質の編成や乳化が起こるからです。

 

 

固相抽出法

固相抽出法は、シリカゲル、アルミナ、オクタデシルシリル化シリカゲル、イオン交換樹脂などのクロマトグラフィーなどに使われる固相を用いることで、固相に目的物を保持させることで邪魔者を取り除きます。

 

 

固相抽出法は溶媒抽出法と比べて、操作が簡単であり、使う有機溶媒が少ないといった特徴があります。

 

除タンパク法

除タンパク法は、生体試料など多くのタンパク質が含まれているものからタンパクを除く方法です。除タンパク法は以下のような方法があります。

 

• 酸変性法；トリクロロ酢酸や過塩素酸などかさ高い酸を加えることによりタンパク質中のイオン結合部位に入りタンパク質を変性させて沈殿させる方法
• 有機溶媒変性法；過量の有機溶媒(メタノールやアセトニトリル)を加えることで疎水結合やπ-π結合を破壊してタンパク質を変性させて沈殿させる方法
• 限外ろ過法；低分子のみを通過させるフィルターである限外ろ過膜を用いて、タンパク質を除去する方法

 

これらの方法で邪魔者を排除することで分析が楽になります。

 

まとめ

• 溶媒抽出法は、水と有機溶媒の中に試料を入れることで、目的物質を片方の層に移すことで、邪魔者と分離する方法
• 固定抽出法は固相を用いて、目的物と邪魔者を分離する方法
• 除タンパク法は生体試料など多くのタンパク質が含まれているものからタンパクを除く方法